Bertine van Hooff-Nusselder studeerde Rechtsgeleerdheid van 1994 tot 2000. Ze volgde de studie in deeltijd, aangezien ze daarnaast ook bij achtereenvolgens twee advocatenkantoren werkte en daarvoor reeds de HBO-opleiding Management in de gastvrijheidsindustrie afrondde. Gedurende haar studententijd was ze actief lid van zeilvereniging De Loefbijter. Tijdens een gala van De Loefbijter ontmoette zij haar huidige man, Alex van Hooff.
Sinds 2000 is Van Hooff-Nusselder werkzaam bij Burgers’ Zoo te Arnhem (vanaf 2004 als operationeel directeur). Tevens is zij sinds 2019 lid van de Provinciale Staten van Gelderland. Voor het CDA is zij woordvoerder op het terrein van onder andere klimaat, milieu en energietransitie.