TEM randapparatuur

Leica EM HPM100

VitrobotDe leica EM HPM100 wordt gebruikt om blokje of druppeltje waterige monsters (tot 200 μm in dikte en 6 mm in diameter) extreem snel (bij meer dan 20 000 K per s) te vitrificeren. Het maakt gebruik van hoge druk (210 kPa - 2100 bar) en vloeibaar stikstof bij - 197 graden Celcius. Dankzij deze behandeling krijgen ijskristallen niet de kans om zich te vormen en blijft de fijne structuur behouden.
Brochure (pdf, 863 kB) van de Leica EM HPM100 high-pressure freezer

FEI Vitroblot

Vitrobot_150pxDe Vitrobot (vitrificatie robot) wordt gebruikt om kleine volumina van cel/-deeltjessuspensies in waterig medium, snel in te vriezen. De werkwijze houdt in:
  • het aanbrengen van het monster op een grid
  • het blotten (wegzuigen) van overtollige hoeveelheden vocht onder gecontrolleerde omstandigheden (ihb luchtvochtigheid, druk en duur bij het blotten)
  • het met hoge snelheid inschieten van de grid in koelvloeistof (vloeibaar ethaan of propaan)
  • Het overbrengen van de grid naar een gridhouder, onder vloeibaar stikstof.

Instructies van het Grigorieff lab

Leica EM AFS Vries-substitutie apparaat

Freeze-substitution deviceMet deze Leica EM AFS is het mogelijk om vries-substitutie toe te passen en daarbij de temperatuuur geleidelijk te laten zakken en weer opkomen (intuitieve bediening via een paneel). Men kan meteen aansluitend op de substitutie het inbedden en polymerizeren van harsen onder ultraviolet licht (met LED) bij een lage temperatuur uitvoeren. Een procedure van vijf dagen kan worden uitgevoerd zonder dat het nodig is om tussentijds vloeibaar stikstof bij te vullen, dankzij het grote volume van de Dewart tank. Monsters kunnen tussen de -140 en +70°C bewaard worden.
Download een folder (pdf, 470 kB) voor het vergelijkbare AFS2 systeem.

Leica ultramicrotomen (Ultracut UCT en UC7 - FC7), EM KMR2 glasmaker, UV vrieskist

De UCTultramicrotoom wordt routinematig gebruikt om conventionele (niet cryo) dunne EM coupes te snijden met glasmessen of met een diamantmes. De aparte coupes of de linten met seriecoupes die van het mes loskomen drijven op de oppervlakte van een water reservoirtje. Deze coupes worden op een formvar grid opgevangen .

Cryo-ultramicrotomeDe Leica EM UC7 wordt gebruikt voor het semidun of ultradun snijden van coupes uit ingebed EM material en voor de voorbereiding van gladde oppervlakten, ten behoeve van LM, TEM, SEM, en AFM waarneming. Deze UC7 ultramicrotoom is uitgebreid met de Leica EM FC7 lage-temperatuur eenheid (cryo-sectioning). Brochure (pdf, 1,3 MB) over de UC7- FC7 apparatuur

Glasmessen kunnen met een Leica EM KMR2 glass maker gemaakt worden (korte beschrijving in deze brochure (pdf, 584 kB)

De Liebherr vrieskist kan gebruikt worden om harsen tbv het insluiten van TEM-monsters bij een lage temperatuur mbv ultraviolet licht te laten polymeriseren.

Cressington 208 carbon coater/glow discharge

cressington-glowdischargerDeze Cressington coater wordt voornamelijk gebruikt als discharger om gridjes hydrofyl te maken: download de procedure (pdf, 511 kB) hiervoor. Een toepassing is bijvoorbeeld geweest de voorbereiding van gridjes tbv onderzoek naar virussen.

TEM: Balzers Baf 400 vries-ets systeem

Baf 400 freeze etch Het wordt in het bijzonder gebruikt om de oppervlaktestructuur van objecten zoals cellen en organellen te onderzoeken en om aanvullende informatie te verkrijgen over de structuur van membranen mbv vriesetsen en vriesbreken.

Edwards 306 opdamp eenheid

Edwards 306 opdamp eenheid voor EMDeze opdampeenheid kan gebruikt worden om metalen (goud, palladium ed) en koolstof op gridjes op te dampen via gloeing.

HG 001 Plunger injectie apparaat

HG 001 Freeze-plungerMet deze plunger kunnen kleine stukjes materiaal (bijv. cellen op een vlies) met een hoge snelheid in vloeibaar propaan worden ingeschoten en zo uiterst snel worden ingevroren waardoor schade door waterkristallen beperkt wordt. Fixatie door kou is weliswaar bewerkelijk als methode, maar het grote voordeel is dat deze methoden minder artefacten veroorzaakt dan chemische fixatie. De vervolgstap in de TEM preparatie is vries-substitutie.

Locaties

HG01.246 voor de ultramicrotomen
HG01.216 voor alle andere randapparatuur

Assistentie

Online boeken

Boekingssyteem (link)

Handleidingen-referenties