Confocale microscopie

Het Gemeenschappelijk Instrumentarium beheert de volgende confocale systemen, beiden bevinden zich in AP-1-ruimtes, geschikt voor het werken met genetisch gemodificeerde organismen (GGO’s) op niveau ML-1, mits deze in een afgesloten houder zitten.

Leica SP8x WLL (kamer HG01.239, AP-1)

De SP8x WLL confocale laser-scanningmicroscoop (CLSM) is gebaseerd op een volledig gemotoriseerd DMi8-statief waarmee x, y, z, t, lambda (golflengte) en sequentiële opnames gemaakt kunnen worden op meerdere posities en in z-stacks. Naast de 405 nm diode levert de White-Light Laser elke gewenste excitatiegolflengte tussen 470-670 nm. De juiste focus kan automatisch gevonden worden op basis van signaal en/of fysieke afstand, en aangrenzende afbeeldingen kunnen aan elkaar geplakt worden met de stitching-module. Deconvolutie is mogelijk door de ingebouwde “Lightning” module, welke gebruik maakt van de grafische verwerkingscapaciteiten van de aangesloten computer. Levende cellen kunnen geobserveerd worden onder een deksel waarmee kooldioxide en luchtvochtigheid gereguleerd wordt, evenals met de temperatuurincubator die om de gehele behuizing heen gemonteerd is.

Objectieven

• 10x / 0.40 Lucht (maximale werkafstand: 2.2 mm)
• 20x / 0.40 Lucht (7.5 mm lange-afstand)
• 40x / 0.60 Lucht (3.3 mm lange-afstand)
• 40x / 1.10 Water (0.65 mm)
• 63x / 1.40 Olie (0.14 mm)
• 100x / 1.40 Olie (0.13 mm)

Lasers

• 405 nm diode laser
• Pulsed White-Light Laser (8x parallele lijnen, vrije keuze tussen 470-670 nm)

Detectors

• 2x GaAsP photomultiplier tubes (PMTs)
• 2x HyD hybride detector (photon counting, gevoelig, met time-gating)
• 1x Transmitted-light PMT (semi-brightfield)

Widefield-epifluorescentiemodus

• DFC365X monochrome camera
• Brightfield-lamp en filter (standaard wit licht)
• DAPI filter (ex. 340 - 380 nm, em. > 425 nm)
• FITC filter (ex. 450 - 490 nm, em. > 515 nm)
• RHOD filter (ex. 517 - 563 nm, em. > 590 nm)
• Y5 filter (ex. 590 - 650 nm, em. 662-738 nm)

Software

• LAS X 3D voor 3D-weergave van opgenomen volumes
• “Navigator” voor programmeren tile-scans en posities
• “Lightning” voor computational clearing en deconvolutie

Incubatie

• Temperatuur-incubatie
• Gasmixer CO₂ / luchtvochtigheidsregulator

Leica SP8 Liachroic (kamer HG01.236, AP-1)

De SP8 Liachroic is een typische CLSM, eveneens gebaseerd op een volledig gemotoriseerd DMi8-statief waarmee x, y, z, t, lambda en sequentiële opnames gemaakt kunnen worden op meerdere posities en in z-stacks. Hier is geen temperatuurincubatie of gasregulatie beschikbaar. De juiste focus kan automatisch gevonden worden op basis van signaal en/of fysieke afstand, en aangrenzende afbeeldingen kunnen aan elkaar geplakt worden met de stitching-module.

Objectieven

• 10x / 0.4 Lucht (maximale werkafstand: 2.56 mm)
• 20x / 0.75 Lucht (7.5 mm lange-afstand)
• 40x / 0.60 Lucht (3.3 mm lange-afstand)
• 40x / 1.30 Olie (0.62 mm)
• 63x / 1.40 Olie (0.14 mm)

Lasers

• 405 nm
• 488 nm
• 552 nm
• 638 nm

Detectors

• 1x GaAsP photomultiplier tube (PMT)
• 2x HyD (photon counting, gevoelig)
• 1x Transmitted-light PMT (semi-brightfield)

Widefield-epifluorescentiemodus

• DFC7000 GT monochrome camera
• Brightfield-lamp en filter (standaard wit licht)
• DAPI filter (ex. 340 - 380 nm, em. > 425 nm)
• FITC filter (ex. 450 - 490 nm, em. > 515 nm)
• Y3 filter (ex. 517 - 563 nm, em. > 590 nm)
• Y5 filter (ex. 590 - 650 nm, em. 662 - 738 nm)

Software

• “Navigator” voor programmeren tile-scans en posities