Light-sheetmicroscopie

Een tweezijdig belichtend light sheet-systeem met 4 typische lasergolflengtes gebaseerd op een Olympus BX43F-statief is bij ons opgesteld. Het systeem is in het bijzonder geschikt voor 3D-opnames van o.a. gehele levende of middelgrote gefixeerde structuren en organismen zoals zebravislarven of jonge planten, waar het belangrijk is dat de laserbelichting qua intensiteit en volume geminimaliseerd wordt en sub-cellulaire resolutie minder belangrijk is. De monsters worden altijd ondergedompeld in een buffer op waterbasis. De light sheet-microscoop kan worden gebruikt voor combinaties van tile-scanning, time-lapse en rotationele acquisities.

PhaseView Alpha3 (kamer HG01.228)

Het monster van maximaal ca. 10 x 10 x 10 mm wordt op de gemotoriseerde houder geplaatst en in een cuvet ondergedompeld met de afmetingen 21 mm (breedte) x 70 mm (lengte) x 25 mm (hoogte). Het cuvet wordt gevuld met 15-20 mL immersievloeistof op waterbasis, zoals PBS-buffer, MQ, zoutwater of embryo-media. De dikte van beide overlappende light sheet lasers die worden gebruikt ter excitatie, ter hoogte van het monster, is ca. 2 micron (Gaussian full-width half maximum). De lasers komen van de zijkant het cuvet binnen door dekglaasjes van categorie no. 1.

Objectieven

• 10x / 0.3 Water (lange-afstand)
• 20x / 0.5 Water (lange-afstand)
• 40x / 0.8 Water (lange-afstand)

Lasers

• 405 nm
• 488 nm
• 561 nm
• 638 nm

Camera en emissiefilters

• Hamamatsu ORCA-FLASH 4.0 V3 monochrome camera

• DAPI filter (em. 420 - 460 nm)
• FITC filter (em. 500- 575 nm)
• RFP filter (em. 575 - 625 nm)
• Far-Red filter (em. 665 - 715 nm)

Software

• QtSPIM software voor opnames in x, y, z, t, phi (rotatie van 360° in 1024 stappen) en tile-scanning.