Widefieldmicroscopie

Het Gemeenschappelijk Instrumentarium beschikt over de volgende widefield-microscopen. De meeste widefieldsystemen bevinden zich in een AP-1 ruimte, geschikt voor het werken met genetisch gemodificeerde organismen (GGO’s) op niveau ML-1, mits deze in een afgesloten houder zitten.

Leica Thunder (kamer HG01.228, AP-1)

De Thunder is een widefieldmicroscoop gebaseerd op een volledig gemotoriseerd DMi8-statief waarmee x, y, z en t- en sequentiële opnames gemaakt kunnen worden op meerdere posities en in z-stacks. De belichting wordt verzorgd door LEDs met specifieke golflengtes van 395, 470, 550 en 640 nm en de bijbehorende emissiefilters voor de typische fluorescente kleurstoffen. De LEDs kunnen ook zonder emissiefilter gebruikt worden. De juiste focus kan automatisch gevonden worden op basis van signaal en/of fysieke afstand, en aangrenzende afbeeldingen kunnen aan elkaar geplakt worden met de stitching-module. Deconvolutie en reductie van uit-focus-signaal kunnen worden gedaan met de ingebouwde “Thunder” computational clearing software voor enkele afbeeldingen of gehele z-volumes. Temperatuurincubatie van de gehele behuizing is beschikbaar - het systeem heeft geen gas- en/of luchtvochtigheidsregulatie.

Objectieven

• 5x / 0.12 Lucht (maximale werkafstand: 14 mm)
• 10x / 0.40 Lucht (2.74 mm)
• 20x / 0.80 Lucht (0.40 mm)
• 63x / 1.20 Water (0.30 mm)
• 63x / 1.30 Glycerol (0.28 mm)
• 100x / 1.47 Olie (0.10 mm)

Lichtbronnen

• Brightfield-lamp (standaard wit licht)
• 395 nm LED
• 470 nm LED
• 550 nm LED
• 640 nm LED

Camera en emissiefilters

Filters zijn ondergebracht in een DFT5-quad meervoudig filterblok voor het snel wisselen tussen golflengtes

• DFC9000 GTC monochrome camera (2 MP)

• DAPI filter (em. 420 - 450 nm)
• FITC filter (em. 506 - 532 nm)
• Y3 filter (em. 581 - 607 nm)
• Y5 filter (em. 666 - 724 nm)

Software

• LAS X 3D voor 3D-weergave van opgenomen volumes
• “Navigator” voor programmeren tile-scans en posities
• “Thunder” voor computational clearing en deconvolutie

Incubatie

• Temperatuur-incubatie

Leica DM2500 (kamer HG01.228, AP-1)

De DM2500 is een handmatig bediende rechtopstaande widefield-microscoop uitgerust met standaard epifluorescentiefilters. De DM2500 kan ook in brightfield- (alle objectieven), dark-field- (10x - 40x objectieven) of fasecontrastmodus (10x - 100x) gezet worden. Afbeeldingen worden opgenomen met de DFC7000T kleurencamera die ook naar monochrome modus kan omschakelen. Voor snellere opnames is “binning” en het selecteren van sub-gebieden mogelijk.

Objectieven:

• 5x / 0.07 Lucht
• 10x / 0.3 Lucht
• 20x / 0.5 Lucht
• 40x / 0.75 Lucht
• 100x / 1.30 Olie

Lichtbronnen:

• Brightfield-lamp en filter (standaard wit licht, ook voor andere contrastmodi)
• EL6000 fluorescentielamp (te gebruiken met filters)

Camera en filters:

• DFC7000T kleuren- en monochrome camera (2.8 MP)

• Transmissiefilter (brightfield, darkfield, fase-contrast)
• DAPI filter (ex. 320 - 380 nm, em. > 425 nm)
• FITC filter (ex. 450 - 490 nm, em. > 515 nm)
• Y3 filter (ex. 515 - 560 nm, em. > 590 nm)
• Y5 filter (ex. 590 - 650 nm, em. 662 - 738 nm)